牛型结核分枝杆菌分泌性蛋白MPB70、MPB83基因串联重组质粒的构建及鉴定

作者：叶俊; 布日额^*; 陈金龙; 吴金花; 锡林高娃; 王金良

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(12): 1429-1432.

DOI：10.13350/j.cjpb.191213

• 结核分枝杆菌
• MPB70基因
• MPB83基因
• 串联表达

目的构建牛型结核分枝杆菌(MB)分泌性蛋白mpb 70、mpb 83基因串联重组表达质粒,为进一步利用工程菌表达、获得相应抗原蛋白奠定实验基础。方法参考NCBI上公布的MB全基因组序列(EU683972.1),在利用DNAstar7.0生物信息软件分析分泌性蛋白mpb70、mpb83抗原性基础上,选择mpb 70、mpb 83基因编码多肽主要抗原域,利用重叠延伸PCR技术构建pGEX-6p-mpb70+mpb83串联重组表达质粒。结果生物信息学预测MPB70、MPB83基因的抗原域分别在30-171位氨基酸和20-190位氨基酸。在mpb70、mpb 83间加入16位柔性多肽序列,在线分析不影响mpb70和mpb83融合后的抗原性。pGEX-6p-1-mpb 70+mpb83经双酶切获得966bp和4966bp两条片段,与预期一致;测序表明mpb70+mpb83融合基因无碱基突变和缺失,重组质粒构建正确。结论确定了MB早期标识性分泌性蛋白mpb70、mpb83基因的抗原域,获得了mpb70、mpb83串联基因,构建的重组原核表达载体柔性多肽的引入确保mpb70和mpb83的天然抗原构象且不影响融合蛋白的抗原性,为重组抗原的表达,单克隆抗体制备以及建立MB分泌性蛋白标识物的快速检测试剂盒奠定了基础。

• 单位
  内蒙古民族大学; 山东省滨州畜牧兽医研究院; 生命科学学院; 动物科技学院