结核分枝杆菌16-kDa α晶体蛋白的原核表达及纯化

作者：王晓娜; 刘大斌; 安小平; 李存; 李建彬; 范华昊; 张文慧; 张博; 米志强; 童贻刚

来源：生物技术通讯, 2012, (04): 515-518.

• 结核分枝杆菌
• α晶体蛋白
• 原核表达
• 纯化 Mycobacterium tuberculosis
• α-crystallin
• prokaryotic expression
• purification

目的:利用基因工程技术原核表达并纯化结核分枝杆菌α晶体蛋白(Acr)。方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增Acr的编码基因,以pCold为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析和纯化该表达产物。结果:构建了具有正确基因序列的Acr重组表达质粒,重组Acr在大肠杆菌BL21(DE3)中经低温诱导得到可溶性表达;分别用6×His的单克隆抗体和16-kDa单克隆抗体对表达产物进行Western印迹分析,结果显示在相对分子质量约19 000处均有特异性条带,与预计大小吻合;纯化后...

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 广西医科大学; 军事医学科学院; 基础医学院