MiR-130b在胶质瘤中的表达及对血管生长的影响

作者：张静; 周永刚; 舒俊斌; 李晓波; 吕晓俊; 叶汝勇; 李正在

来源：医学研究杂志, 2020, 49(05): 121-135.

• 胶质瘤
• miR-130b
• TNF-α
• 血管生长

目的探讨微小RNA-130b (microRNAs-130b, miR-130b)在胶质瘤细胞中的表达以及调控体外胶质瘤细胞血管生长的作用。方法利用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR, qRT-PCR)法检测miR-130b在胶质瘤细胞株U251、SHG-44和U87及人正常星形胶质细胞株NHA中转录水平的表达。使用miR-130b模拟物(miR-130b mimics)或miR-130b抑制剂(miR-130b inhibitor)瞬时转染体外胶质瘤细胞。提取胶质瘤细胞的条件培养基(conditioned medium, CM),酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测CM中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A, VEGFA)的表达。CM作用人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)后,Transwell小室实验检测体外HUVECs运动能力。小管形成实验检测HUVECs诱导血管新生的能力。通过生物信息学工具分析miR-130b可能靶基因,荧光素酶报告实验测定荧光素酶活性。凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)活性。Western blot法测定肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和VEGFA蛋白在胶质瘤细胞中的表达水平。结果 NHA细胞中miR-130b的表达水平分别为U251、SHG-44和U87细胞的4.29、7.23和10.30倍,差异均有统计学意义(P=0.000)。U87细胞经转染miR-130b模拟物后可明显下调CM中VEGFA表达水平,同时抑制HUVECs体外侵袭和小管形成能力。U251细胞经转染miR-130b抑制剂后可显著上调CM中VEGFA表达水平,并促进HUVECs体外侵袭和小管形成能力。荧光素酶报告实验验证TNF-α是miR-130b的直接作用靶点。与模拟物NC组比较,转染miR-130b模拟物后U87细胞中NF-κB活性、TNF-α和VEGFA蛋白表达均明显下调。与抑制剂NC组比较,转染miR-130b抑制剂后U251细胞中NF-κB活性、TNF-α和VEGFA蛋白表达均显著上调。结论 miR-130b在胶质瘤细胞中表达下调并通过靶向调控TNF-α/NF-κB/VEGFA通路抑制体外胶质瘤细胞血管生长。

• 单位
  浙江省肿瘤医院; 永康市第一人民医院