重组人胰岛新生相关蛋白的高水平表达与纯化

作者：沙建平; 薛耀明; 陈炫; 朱永红; 李时升; 王晓勤; 卓凤婷; 曾展军

来源：中国生物工程杂志, 2007, (11): 1-5.

• 胰岛新生相关蛋白
• 表达
• 纯化
• 免疫原性 Islet neogenesis associated protein Expression Purification Immunologenicity

通过RT-PCR体外扩增目的基因胰岛新生相关蛋白(isletneogenesis associated protein,INGAP),并将其克隆入原核表达载体pET22b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在,洗涤杂蛋白后用尿素溶解,经Heparin Agrose亲合柱层析分离后,再用Superdex75凝胶过滤层析进一步纯化。纯化后的INGAP皮下注射免疫家兔,制备兔抗INGAP血清,采用免疫双扩、ELISA评价INGAP的免疫活性。结果显示INGAP表达量高达菌体总蛋白的40%左右,经HPLC测定,分离纯化后的目标蛋白纯度达到98.81%,且具有...

• 单位
  南方医院; 中国人民解放军陆军军医大学; 暨南大学; 南方医科大学