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摘要
目的探究重组表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CsCP)的枯草杆菌芽孢(B.s-CsCP)的保存方法,并评价其保存效果。方法制备B.s-CsCP芽孢并将其分为单蒸水重悬(液体芽孢)和冷冻干燥成粉末(冻干芽孢)两份,分别用EP管均等分装,储存在室温(RT)、4℃、-20℃及-80℃温度条件下,使用稀释平板计数法定期检测芽孢的存活率,免疫荧光法检测芽孢保存24个月后融合蛋白的表达情况。将4℃保存≥24个月的液体芽孢(B.s-CsCP-W-4)、RT保存≥24个月的冻干芽孢(B.s-CsCP-P-RT)及新鲜制备的重组芽孢分别经口免疫小鼠,ELISA及微板法测定小鼠肠黏液和胆汁中CsCP特异性sIgA水平以及肝功能指标。结果液体芽孢在4℃、-20℃及-80℃保存24个月的存活率分别为84.5%、93.5%和94.3%,冻干芽孢在RT、4℃、-20℃及-80℃保存24个月的存活率分别为84.6%、92.4%、93.8%和92.8%。除了RT,液体芽孢在其余3个温度下保存24个月均具有较高的CsCP融合蛋白表达率,冻干芽孢在4个温度条件下均高表达。B.s-CsCP-W-4和B.s-CsCP-P-RT均能显著提高小鼠肠黏液以及胆汁中特异性sIgA的水平(P<0.01),与新鲜制备的芽孢比较差异无统计学意义(P>0.05)。此外,B.s-CsCP-W-4和B.s-CsCP-P-RT对小鼠肝功能均无不良影响。结论 B.s-CsCP芽孢的低温液体和常温冻干粉剂型均能长期有效保存,其具有制作简便、安全有效及存储和运输方便等优势。
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