构建表达膜锚定荧光素酶的载体实现细胞自发光成像

作者：陆琤; 张硌; 张鹏^*

来源：中国医学装备, 2019, 16(10): 145-147.

• 荧光素酶
• 膜锚定
• 生物发光
• 自发光成像

目的:构建能稳定表达膜锚定Gaussia荧光素酶(GLuc)的载体,以实现细胞自发光成像。方法:采用人源表皮生长因子受体(EGFR)、巨噬细胞集落刺激因子受体(MCSFR)、白细胞介素-4受体α链(IL4Rα)信号肽将GLuc的信号肽替换掉,并在GLuc后分别加上EGFR、MCSFR及IL4Rα的跨膜结构域,构建表达膜锚定的GLuc的载体,用慢病毒感染的方法将其导入永生化的小鼠外周血来源巨噬细胞(iBloodMC),通过在细胞和培养上清中加入GLuc底物检测发光,从而检测GLuc的表达。结果:iBloodMCGLuc-EGFR和iBloodMCGLuc-IL4Rα均能稳定表达荧光素酶,且iBloodMCGLuc-EGFR的GLuc表达量较高,EGFR将GLuc锚定在膜上效果较好。结论:表达膜锚定GLuc的载体构建成功,将其导入细胞,加入底物可实现细胞自发光成像。

• 单位
  解放军总医院