乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

作者：王宇; 赵予晗; 焦安惠; 王玉琪; 高青山^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3909-3917.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.10.023

• 乙草胺
• 小鼠
• 卵母细胞
• 体外成熟
• 体外受精
• 早期胚胎

【目的】研究乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响，为研究体内乙草胺对卵母细胞质量的影响提供参考。【方法】将收集的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)置于含有不同浓度(0(对照组)、10、50、100、130、200μmol/L)乙草胺的体外成熟培养液中培养14 h,统计卵母细胞第一极体排出率，进行体外受精后，统计体外受精胚胎的囊胚率，筛选出适宜于卵母细胞体外培养的乙草胺浓度。将COCs在对照组和筛选出的适宜浓度的乙草胺组成熟培养液中培养14 h后，利用DCFH-DA检测卵母细胞活性氧(ROS)水平；利用CellTrackerTM蓝色染料检测卵母细胞谷胱甘肽(GSH)水平；利用JC-1染色法检测卵母细胞线粒体膜电位水平(mitochondrial membrane potential, MMP);利用实时荧光定量PCR检测卵母细胞内凋亡相关基因的表达水平，利用Hoechst 33342染色检测体外受精胚胎的囊胚细胞总数，用Fluorescein-dUTP染色法检测囊胚细胞凋亡率。【结果】与对照组相比，100、130、200μmol/L乙草胺组卵母细胞的第一极体排出率显著降低(P<0.05),100和130μmol/L乙草胺组体外受精胚胎的囊胚率显著降低(P<0.05),200μmol/L乙草胺组体外受精胚胎未发育到囊胚期，因此选择100和130μmol/L乙草胺进行后续试验。与对照组相比，在100和130μmol/L乙草胺组中，卵母细胞ROS水平显著升高(P<0.05),GSH水平及MMP显著降低(P<0.05),卵母细胞中促凋亡基因Caspase-9的相对表达量显著升高(P<0.05),而抗凋亡基因Bax、Bcl-2的相对表达量显著降低(P<0.05);100和130μmol/L乙草胺组囊胚细胞总数显著降低(P<0.05),囊胚细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。【结论】乙草胺通过提高卵母细胞内ROS及促进卵母细胞凋亡降低卵母细胞的质量，从而影响卵母细胞受精后胚胎的发育潜力。

• 单位
  延边大学