应用PCR技术对先天性长QT综合征KCNQ1基因进行定点突变的研究

作者：李伟; 杨钧国; 任法鑫; 康彩练; 张守焰

来源：遗传, 2004, 26(5): 589-593.

DOI：10.3321/j.issn:0253-9772.2004.05.005

• 长QT综合征
• KCNQ1
• PCR
• 定点突变

利用聚合酶链反应(PCR)技术对长QT综合征(LQTS)KCNQ1基因进行定点突变的研究.首先设计两对引物(包含预定的突变),通过3轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段,然后将片段克隆入T载体中,通过酶切连接的方法将突变点引入到pIRES2-EGFP-KCNQ1中,随后用Effectene转染试剂介导转染HEK293细胞.结果在真核表达载体pIRES2-EGFP-KCNQ1基础上获得了KCNQ1 cDNA C934T的突变体,测序表明在序列中发生了预期的突变.将含突变点的pIRES2-EGFP-KCNQ1转染HEK293细胞后,在荧光显微镜下观察到被转染的HEK293细胞发出绿色荧光,表明含突变点的pIRES2-EGFP-KCNQ1得到了表达.

• 单位
  华中科技大学同济医学院