兔出血症病毒1、2型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用

作者：王冠萱; 陈萌萌; 仇汝龙; 范志宇; 胡波; 宋艳华; 魏后军; 葛雷; 徐为中; 王芳^*; 钱莺娟^*

来源：江苏农业科学, 2023, 51(18): 40-44.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2023.18.006

• 兔出血症病毒1型
• 兔出血症病毒2型
• 双重TaqMan qPCR

兔出血症(rabbit hemorrhagic disease, RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血症病毒1型(GI.1)和兔出血症病毒2型(GI.2)2种基因型均有在我国流行。为了更好地进行流行病学调查、实时监测兔出血症发展趋势和临床诊断，建立了一种检测RHDV1型和RHDV2型病原的快速、简单、特异且敏感的TaqMan实时PCR。结果显示，稀释度为1×108～1×104 copies/μL标准品建立的标准曲线有良好的线性关系，决定系数r2为0.999;该方法对RHDV1型和RHDV2型具有高度特异性，与兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌等其他病原没有任何交叉反应；检测灵敏度为100～1 000 copies/μL;组内和组间变异系数在0.01%～1.61%之间。用该方法对60份临床肝脏样品和52份鼻肛拭子样本进行检测，结果显示，RHDV检出率为70.5%,敏感性显著高于普通RT-PCR方法(51%)。因此，该方法能够同时检测RHDV1型和RHDV2型，可用于鉴别诊断兔出血症病毒。

• 单位
  江苏省农业科学院