乙醛脱氢酶的克隆表达及其酶学性质

作者：豆欣喜; 张明; 林材; 吴殿辉; 李晓敏; 孙军勇; 蔡国林; 陆健

来源：食品与发酵工业, 2018, 44(04): 22-28.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.016237

• 人源乙醛脱氢酶2
• 酿酒酵母
• 克隆表达
• 酶学性质

将Gene Bank中人源乙醛脱氢酶2的基因序列根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的密码子偏好性进行密码子优化后合成目的基因ALDH2,采用融合PCR技术,构建人源ALDH2基因的表达组件TRP1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-TRP1R。通过电转化的方法将基因表达组件通过同源重组整合到酿酒酵母W303-1A的基因组上,获得基因工程菌W303-ALDH2。工程菌发酵后的粗酶液经His TrapTMexcel亲和层析柱纯化获得重组ALDH2,其活性为20.70 U/mg;重组酶的相对分子质量是56 k Da;最适反应pH和温度分别为5.0和35℃;除Na+外,K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+均能不同程度地提高ALDH2的酶活。以乙醛为底物测得酶的Km值为0.908 mmol/L,最大反应速度Vmax为114.94 U/mg;以辅酶NAD+为底物测得酶的Km值为0.282 mmol/L,最大反应速度Vmax为58.82 U/mg。

• 单位
  江苏省农垦麦芽有限公司; 江南大学; 生物工程学院; 工业生物技术教育部重点实验室