猫杯状病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

作者：程晨曦; 刘家森; 胡晓亮; 刘永相; 蒋艳妹; 刘晓晓; 曲连东

来源：中国预防兽医学报, 2017, 39(12): 1017-1021.

• 猫杯状病毒
• VP1-E蛋白
• 原核表达
• 单克隆抗体

为制备抗猫杯状病毒（FCV）衣壳蛋白VP1的单克隆抗体（MAb）及鉴定其表位,本研究以原核表达的重组VP1-E蛋白（aa427aa524）免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合制备杂交瘤细胞;以纯化的FCV-2280病毒粒子作为检测抗原,采用间接ELISA检测方法筛选杂交瘤细胞株,分析杂交瘤细胞所分泌的抗体亚型、中和活性及所识别的抗原表位等。结果表明,获得两株稳定分泌抗FCV VP1-E MAbs的杂交瘤细胞E2F1和E2F6,抗体均为IgG1亚型,轻链为κ链。杂交瘤细胞分泌的抗体无中和活性。Western blot结果显示,两种抗体可以特异性识别FCV-2280,表明其针对的抗原表位为线性表位。两株MAb识别VP1-E序列均为467YICGSLQRAWG477。生物信息学分析显示该抗原表位在FCV VP1蛋白中相对保守。该MAb为建立特异性强、灵敏度高的FCV的检测方法奠定基础。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室