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摘要
丝氨酸羧肽酶能够剪切肽链C末端的氨基酸，在大豆蛋白脱苦中有着广泛的应用。该研究将黑曲霉中3个丝氨酸羧肽酶基因(CPG、CPF、CPA)在低背景的无孢黑曲霉HL-1中进行重组表达。利用启动子PnaⅡ、终止子Ttef和营养缺陷型筛选标记pyr G构建分别含自身信号肽和糖化酶信号肽的丝氨酸羧肽酶表达载体；利用PEG介导的转化法转化无孢黑曲霉宿主HL-1，构建了丝氨酸羧肽酶重组表达菌株。通过摇瓶发酵筛选得到高表达重组菌株HL-CPG，其丝氨酸羧肽酶酶活达到163.71 U/mL。利用6ⅹHis标签进行镍柱亲和层析得到单一的丝氨酸羧肽酶CPG并研究了其酶学性质，该酶最适反应温度为40℃，最适p H为3.5,Cu2+具有明显抑制效果。另外，将重组表达的丝氨酸羧肽酶CPG与胃蛋白酶复配水解大豆蛋白，水解液中疏水性氨基酸Leu、Tyr和Phe的含量分别增加606.47μg/m L、434.06μg/m L和205.11μg/m L。综上所述，该研究在黑曲霉中成功实现丝氨酸羧肽酶的高效表达，对大豆蛋白水解液脱苦处理工艺具有一定的借鉴意义。
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