结核分枝杆菌分泌蛋白Rv0674的特异性结合肽的筛选

作者：董利军; 梁忠喆; 刘通; 王大军; 王琦; 杨延辉^*

来源：宁夏医科大学学报, 2019, 41(06): 572-576.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2019.06.007

• 结核分枝杆菌
• Rv0674蛋白
• 噬菌体展示技术
• 肽分子

目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)分泌蛋白Rv0674,筛选与Rv0674蛋白特异性结合的肽分子。方法用PCR从MTB(H37Rv)基因组中扩增出Rv0674基因。克隆到pEASY-E1表达载体上,将测序验证正确的重组表达质粒转化入E. coli BL21中,用IPTG诱导蛋白表达,Ni2+亲和层析法纯化目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后,将纯化后的Rv0674蛋白包被到96孔板上,再利用噬菌体展示技术,经过连续4轮特异性亲和筛选,对第4轮产物随机挑取单独的噬菌斑,提取基因组并测序,用SnapGene 4.1.4比对并翻译多肽的基因序列。结果构建了Rv0674序列正确的重组表达质粒,获得分子量约为26.5kD的可溶性Rv0674蛋白。从第4轮的洗脱物中,随机挑选40个噬菌斑。测序结果可翻译成10种多肽分子,其中重复19次的多肽序列为TSTMMMHMNL。结论通过噬菌体展示技术筛选到TSTMMMHMNL多肽序列,对Rv0674蛋白的亲和力和特异性最好。

• 单位
  广州中医药大学; 宁夏医科大学