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摘要
目的观察低氧条件下HIF-1α/VEGF/Notch信号通路在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成中的作用。方法将HUVEC进行常氧和低氧[二氯化钴 (CoCl2),200 μmol/L]诱导,再将常氧和低氧处理的HUVEC应用Notch1信号通路的抑制剂DAPT (30 μmol/L,24 h)和激活剂JAG-1 (30 μmol/L,24 h)干预。通过体外小管形成实验观察低氧对HUVEC血管生成能力的影响。应用RT-PCR和Western blot检测HUVEC中低氧诱导因子-1α (HIF-1α)、血管内皮生长因子 (VEGF)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)和Notch1信号分子 (Notch1、Dell4和JAG-1)的mRNA和蛋白表达。通过Transwell迁移实验和伤口愈合实验观察低氧、DAPT、JAG-1对HUVEC迁移能力的影响。应用MTT法检测低氧及Notch1对HUVEC增殖的影响。两组间比较采用t检验,采用析因设计方差分析低氧和DAPT以及低氧和JAG-1对HUVEC迁移能力、距离、小管形成能力和细胞增殖的交互作用。结果与常氧组比较,低氧组小管总长[(8.18±0.62)mm比(15.43±1.32)mm]增高,差异具有统计学意义(P < 0.05)。与常氧组比较,低氧组的HIF-1α、VEGF、MMP-9、Notch1、Dell4和JAG-1的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量 (1.01±0.03比4.43±0.35,1.02±0.03比3.55±0.28,0.98±0.04比3.24±0.25,1.01±0.03比3.22±0.25,0.99±0.02比2.89±0.22,1.02±0.04比2.43±0.19,0.98±0.01比3.13±0.24,0.98±0.02比2.67±0.21,0.97±0.03比2.45±0.19,1.01±0.03比2.44±0.19,1.00±0.04比2.30±0.18,1.03±0.05比2.27±0.18)均升高,差异有统计学意义(P均 < 0.05)。Transwell迁移实验和伤口愈合实验显示,低氧条件下,DAPT干预使HUVEC的迁移能力降低,JAG-1干预使HUVEC的迁移能力升高(P均 < 0.05)。小管形成和MTT法测定显示,低氧条件下,DAPT干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力降低,JAG-1干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力升高(P 均 < 0.05)。析因设计的方差分析结果显示,低氧和JAG-1对迁移细胞数、小管形成和细胞增殖能力交互作用具有协同作用(P < 0.05)。结论低氧可通过激活HIF-1α/VEGF/Notch1信号通路提高HUVEC的血管生成能力、迁移能力和细胞增殖能力。
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