p.Gly86Asp变异导致遗传性蛋白C缺陷症的致病机制分析

作者：蒋淑婷; 王欢欢; 刘媚娜; 杨丽红; 金艳慧; 谢海啸; 徐琦煜; 王明山^*

来源：中华医学遗传学杂志, 2022, 39(07): 685-688.

• 蛋白C缺陷症
• PROC基因
• 基因变异
• 体外表达实验

目的通过体外表达实验分析p.Gly86Asp变异导致遗传性蛋白C(protein C, PC)缺陷症的分子致病机制。方法构建野生型和p.Gly86Asp变异型PC表达质粒, 分别转染HEK 293FT细胞。提取转染细胞内的总RNA, 将RNA逆转录成cDNA, 通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)法检测转染细胞内PROC基因的转录水平。收集细胞培养上清液和细胞裂解液, 通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测PC抗原(PC antigen, PC:Ag)含量;采用蛋白免疫印迹试验(Western blotting, WB)检测PC含量以及相对分子质量。结果 qRT-PCR结果显示野生型PC和p.Gly86Asp变异型PC在转录水平没有明显差异。与野生型PC:Ag含量相比, 变异型PC:Ag含量在细胞培养上清液和细胞裂解液中分别为81.3%±2.6%和110.0%±2.8%。WB结果表明, 野生型PC和变异型PC的相对分子质量没有明显差异;变异型PC的含量在细胞裂解液中明显高于野生型PC, 而在细胞培养上清液中明显低于野生型PC。结论 PC分泌障碍可能是p.Gly86Asp变异导致遗传性PC缺陷症的分子致病机制。

• 单位
  温州医科大学附属第一医院