副溶血弧菌外膜蛋白A(VP0764)的分析表达及其免疫保护效果初步评价

作者：张欣; 韩先干; 王亚磊; 张海洋; 王权; 祁克宗; 蒋蔚^*; 宋祥军^*

来源：中国预防兽医学报, 2020, 42(11): 1152-1158.

• 副溶血弧菌
• 外膜蛋白A
• 免疫原性
• 免疫保护性

外膜蛋白A(OmpA)为副溶血弧菌主要表面蛋白之一,具有较强的免疫原性,在疫苗上有很好的应用前景。为评价副溶血弧菌OmpA的免疫效果,本研究通过PCR方法获得副溶血弧菌SH112株的ompA(VP0764)基因的全长片段,测序结果显示该蛋白编码区全长990 bp。对其编码蛋白质进行生物信息学分析,结果显示该蛋白是含有信号肽的稳定蛋白,无跨膜结构,有11个抗原决定簇,具有较高免疫原性。扩增去除信号肽序列的成熟蛋白基因903 bp,并构建重组表达载体pET28a-ompA进行原核表达,结果显示,获得分子量约为39 ku的重组蛋白HisOmpA(VP0764)。采用该蛋白免疫ICR小鼠(0.1 mg/只)3次后收集血清制备鼠多克隆抗血清,利用ELISA检测抗血清效价,结果显示制备的鼠多克隆抗血清效价达132 000以上。利用western blot检测制备的鼠多克隆抗血清,结果显示该血清可与表达蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,表明所表达的目的蛋白具有良好免疫原性,能识别天然OmpA蛋白。将45只8周龄ICR小鼠随机分成3组,分别免疫灭活的SH112全菌疫苗(1×108cfu/只)、His-OmpA(VP0764)重组蛋白(0.1 mg/只)及PBS(200μL/只),每两周免疫一次,三免后10 d采用副溶血弧菌SH112株(2×107cfu/只)攻毒,结果显示免疫SH112全菌和His-OmpA(VP0764)重组蛋白的实验组小鼠免疫保护率分别是73%和40%,与对照组差异显著。本研究为副溶血弧菌OmpA的功能与疫苗开发研究奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所; 安徽农业大学