犀地凉血方通过LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络对HaCaT细胞增殖、凋亡影响的研究

作者：唐志铭^*; 荆梦晴; 陆鹭; 单霄; 张翠侠; 张晓宇; 孟飒

来源：中华皮肤科杂志, 2023, 56(07).

• 银屑病
• 微RNAs
• STAT3转录因子
• 角蛋白细胞
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 犀地凉血方
• LncRNA NEAT1

目的探讨犀地凉血方对HaCaT细胞LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络及细胞增殖、凋亡的影响。方法以IL-17诱导的HaCaT细胞为研究对象, 通过qPCR、Western印迹法检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3 mRNA和蛋白在HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中的表达。采用荧光原位杂交技术(FISH)观察LncRNA NEAT1、miR-485-5p在HaCaT细胞中的表达;采用双萤光素酶报告基因实验验证LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3之间的靶向调控关系。犀地凉血方煎煮取汁给予大鼠灌胃后采集含药血清, 以含药血清干预和/或LncRNA-NEAT1过表达载体转染HaCaT细胞, 将HaCaT细胞分对照组、过表达LncRNA NEAT1组、犀地凉血方组、犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组, 采用qPCR、Western印迹法、流式细胞仪、CCK8等实验技术分别检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。采用独立样本t检验、单因素方差分析、LSD-t检验进行统计学分析。结果 IL-17诱导的HaCaT细胞组LncRNA NEAT1、STAT3 mRNA相对表达水平(1.84 ± 0.21、2.20 ± 0.24)高于NHEK细胞组(1.00 ± 0.11、1.00 ± 0.11, 均P < 0.05), miR-485-5p相对表达水平(0.32 ± 0.04)低于NHEK细胞组(1.00 ± 0.12, t = 2.94, P = 0.015);STAT3、p-STAT3蛋白表达水平(1.27 ± 0.13、2.43 ± 0.16)均高于NHEK细胞组(1.00 ± 0.11、1.00 ± 0.10, t = 2.54、3.02, 均P < 0.05)。FISH检测显示, miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质。双萤光素酶报告基因实验显示, 共转染野生型LncRNA NEAT1、STAT3重组质粒时, miR-485-5p组细胞相对萤光素酶活性明显低于阴性对照组(均P < 0.05);而共转染突变型LncRNA NEAT1、STAT3重组载体质粒时, miR-485-5p组细胞萤光素酶活性与阴性对照组差异无统计学意义(均P > 0.05)。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞中LncRNA NEAT1、STAT3(包括STAT3 mRNA和STAT3、p-STAT3蛋白)表达水平高于对照组, miR-485-5p表达水平低于对照组;犀地凉血方组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于对照组, miR-485-5p表达水平高于对照组;犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于过表达LncRNA NEAT1组, 而miR-485-5p表达水平高于过表达LncRNA NEAT1组(均P < 0.05)。CCK8法检测显示, 药物干预24、48、72 h时, 过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性明显高于对照组, 犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性高于犀地凉血方组, 但二者均低于对照组(均P < 0.05)。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞凋亡率(5.84% ± 0.28%)低于对照组(14.75% ± 0.83%, LSD-t = 3.48, P = 0.002), 而犀地凉血方组(35.72% ± 3.62%)高于对照组(LSD-t = 5.34, P = 0.001);犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组细胞凋亡率(27.64% ± 2.82%)高于过表达LncRNA NEAT1组(LSD-t = 9.06, P < 0.001)。结论犀地凉血方能抑制HaCaT细胞增殖并促进其凋亡, 作用机制与其干预LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络相关。

• 单位
  徐州市中医院