应用CRISPR/Cas9技术制备Nogo-B敲除小鼠模型

作者：刘博; 庄颖洁; 董晓宇; 万军; 高利利^*

来源：世界最新医学信息文摘, 2019, A5: 108-109.

DOI：10.19613/j.cnki.1671-3141.2019.105.066

• 基因敲除
• CRISPR/Cas9
• Nogo-B基因

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立Nogo-B敲除的小鼠模型,为研究Nogo-B在肝纤维化中作用机制提供实验基础。方法根据Nogo-B基因第一外显子碱基序列,设计针对Nogo-B的sgRNA,构建sgRNA表达质粒,将体外转录sgRNA和Cas9 mRNA对C57BL/6小鼠的受精卵进行显微注射。使用基因测序检测Nogo-B基因碱基的突变情况。取小鼠肝脏匀浆后提取总蛋白,通过WB检测Nogo-B在肝脏中的表达。结果获得了Nogo-B基因突变的F1代纯合子小鼠,Nogo-B基因缺失小鼠与野生型小鼠相比,肝功能(转氨酶、胆红素、白蛋白和碱性磷酸酶)无明显差异。与野生型C57BL/6相比,敲除小鼠肝脏中Nogo-B表示显著降低。结论成功构建了Nogo-B基因敲除小鼠动物模型,为探讨Nogo-B基因在肝纤维化中的作用机制提供实验基础。

• 单位
  解放军总医院