摘要
目的体外实验评价紫花杜鹃30-38馏分(DJ 30-38)抗登革2型病毒(DENV-2)效果,并利用ICR乳小鼠模型进行抗病毒感染的验证。方法 MTT法测药物对细胞毒性;CCK-8法检测药物对细胞的保护作用;结晶紫染色观察DJ 30-38不同浓度对DENV-2子代病毒释放的影响;实时荧光定量PCR检测不同浓度的DJ 30-38对DENV-2病毒复制中E和NS1蛋白基因表达的抑制率;Western印迹法检测不同浓度的DJ 30-38对DENV-2病毒中E和NS1蛋白表达的抑制。ICR乳小鼠分为空白、模型和DJ 30-38(5和10 mg·kg-1)4组,除空白组外的其余各组ICR乳小鼠颅内注射(400 PFU·mL-1)及ip给予(4×105PFU·mL-1)DENV-2病毒液20μL,空白对照组注射等量RPMI-1640培养基,造模当天,DJ 30-38组乳小鼠提前2 h ig给药,以后每隔24 h给药1次,每天观察并记录各组乳小鼠的体重及发病情况,计算各组症状评分和生存率,取乳小鼠脑做病理切片的HE染色,用实时荧光定量PCR检测其他各脏器病毒E和NS1蛋白基因表达水平。结果 DJ 30-38能显著改善DENV-2感染BHK-21细胞引起的细胞病变效应,抑制病毒子代的释放,抑制DENV-2感染后E和NS1基因表达水平,能显著降低病毒感染后E和NS1蛋白的表达。在DENV-2感染的ICR乳小鼠模型中,DJ 30-38改善了病毒感染乳小鼠的症状评分,延长了生存时间,给药各组乳小鼠脑、心、肝、脾、肺、肾等脏器的病毒拷贝数与模型组相比均降低,且呈剂量依赖性。结论 DJ 30-38具有抗DENV-2的作用。
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单位南方医科大学; 医药学院