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摘要
目的应用条件性重编程细胞(Conditionally Reprogrammed Cells,CRCs)技术建立高效、稳定的人乳腺癌干细胞体外培养,建立潜在的乳腺癌干细胞靶向药研究模型。方法收集人乳腺癌组织样本,采用CRCs技术分离培养原代乳腺癌细胞,用CD24免疫磁珠标记原代乳腺癌细胞后使用磁性细胞分选仪分选出乳腺癌干细胞,免疫荧光法测定广谱细胞角蛋白(Pan Cytokeratin,pan-CK)表达,流式细胞术检测干细胞标志物CD44,CD24和乙醛脱氢酶1(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH1)的表达水平,克隆形成实验和微球体形成实验分别用于测定克隆形成和乳腺微球体形成。结果利用CRCs技术分离培养的原代乳腺癌细胞能够稳定传代扩增至第9代,并保持乳腺癌细胞的特征。采用CRCs技术结合磁性细胞分选仪对乳腺癌原代细胞进行培养和分选后,乳腺癌非干性细胞微球体形成率显著低于干性细胞,乳腺癌非干性细胞克隆形成率显著低于干性细胞。乳腺癌干细胞可扩增至第5代。结论联合利用CRCs和免疫磁珠分选能够从原代乳腺癌组织中高效分离出具有肿瘤干细胞生物学特性并能稳定传代扩增的乳腺癌干细胞,这一体系可作为潜在的乳腺癌干细胞靶向药物研究模型。
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