1株产纤维素酶细菌的内切-β-葡聚糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

作者：郭建华; 蒋海娇; 郭宏文; 邹东恢; 王燕

来源：江苏农业科学, 2022, 50(16): 227-234.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2022.16.033

• 纤维素酶产生菌
• 内切-β-葡聚糖苷酶
• 分离纯化
• 酶学性质

为对1种细菌来源的内切-β-葡聚糖苷酶进行分离纯化和酶学性质研究，利用盐析沉淀、凝胶层析、疏水层析和弱阳离子交换色谱等对细菌菌株DM-4所产内切-β-葡聚糖苷酶进行了分离纯化，利用SDS-PAGE电泳对其纯度和分子量进行检测，考察温度和pH值对酶活力的影响，最后计算酶的反应动力学常数。结果显示，经分离纯化，获得2个酶活组分CMC酶Ⅰ和酶Ⅱ,其纯化倍数分别为45.94倍和32.27倍，回收率分别为14.66%和8.33%。CMC酶Ⅰ和酶Ⅱ分子量分别为38.99、45.53 ku,其最适作用温度分别为55～60℃和55℃,最适pH值均为7.5。温度低于70℃时，2种酶组分均对热稳定，并在pH值为6.0～8.0范围内具有良好稳定性。CMC酶Ⅰ的Km为2.55 g/L,Vm为37.59μg/(min·mL);CMC酶Ⅱ的Km值为4.37 g/L,Vm为28.82μg/(min·mL)。结果表明，采用盐析沉淀、凝胶层析、疏水层析和弱阳离子交换色谱多种分离技术对菌株DM-4所产内切-β-葡聚糖苷酶具有良好的分离纯化效果，经凝胶电泳检测，酶组分达电泳级纯度。酶学性质表明，菌株DM-4所产的2种CMC酶组分均为中性偏碱性纤维素酶，这与霉菌来源的纤维素酶有所不同。

• 单位
  食品与生物工程学院; 齐齐哈尔大学