科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的:观察胰岛再生源蛋白Ⅲγ(RegⅢγ)修饰人脐带间充质干细胞(HuMSCs)对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的小鼠心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响。方法:从新鲜脐带组织中提取HuMSCs,倒置显微镜观察形态，流式细胞仪检测细胞表面抗原表达；采用含过表达RegⅢγ的慢病毒感染HuMSCs,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测RegⅢγ mRNA表达水平。将40只小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组，每组10只。模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组采用腹腔注射CVB3建立心肌炎模型，HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组再分别尾静脉注射HuMSCs、RegⅢγ-HuMSCs。14 d后，采用高分辨率小动物超声成像系统记录小鼠心脏超声指标；酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-23含量；苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤情况，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌组织细胞凋亡水平，免疫组织化学染色测定心肌组织T淋巴细胞表面抗原(CD4、CD8)和巨噬细胞特异性抗体(CD68)的表达。结果:分离的细胞呈典型纺锤形，细胞表面抗原CD44、CD73、CD90呈高表达，CD34、CD45、人类白细胞抗原-DR蛋白(HLA-DR)呈低表达，说明成功分离到HuMSCs。经过慢病毒感染的HuMSCs有明显绿色荧光蛋白表达，RegⅢγ mRNA表达水平高于未感染的细胞(P<0.05),说明成功得到RegⅢγ修饰的HuMSCs。与对照组比较，模型组小鼠射血分数(EF)、缩短分数(FS)降低，左室舒张末期容积(LVEDV)和左室收缩末期容积(LVESV)升高，血清IL-2、IL-6和IL-23含量增加，IL-4和IL-10含量减少，心肌组织内炎性细胞浸润明显，TUNEL阳性率增加，CD4、CD8及CD68蛋白表达均呈强阳性(P<0.05);与模型组比较，HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高，LVEDV和LVESV降低，血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少，IL-4和IL-10含量增加，心肌组织炎性细胞浸润减少，TUNEL阳性率减少，CD4、CD8及CD68蛋白表达均下降(P<0.05);相较于HuMSCs组，RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高，LVEDV和LVESV降低，血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少，IL-4和IL-10含量增加，心肌组织未见明显炎性细胞浸润，TUNEL阳性率减少，CD4、CD8及CD68蛋白表达下降(P<0.05)。结论:RegⅢγ修饰的HuMSCs可减轻CVB3诱导的小鼠心肌炎心肌损伤与炎性细胞浸润，改善心脏功能。
- 单位
