化学合成的Ac-SDKP类似物FAM-Aca-SDKP与HSC-T6细胞表面结合特征分析

作者：周达; 何玲楠; 王晶; 丁永年; 陈源文^*; 范建高^*

来源：中华肝脏病杂志, 2016, 24(03): 186-190.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2016.03.006

• 肝硬化
• 肝星状细胞
• 受体
• 配体
• Ac-SDKP
• 结合特性

目的利用化学合成N-乙酰基-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(Ac-SDKP)类似物FAM-Aca-SDKP, 探讨Ac-SDKP与肝星状细胞株(HSC-T6细胞)的结合及其结合的基本物理特征。方法化学合成携带绿色荧光的Ac-SDKP类似物短肽[5-FAM]-酪氨酸-氨基己酸-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(FAM-Aca-SDKP), 实时定量PCR检测其对HSC胶原分泌影响验证其生物学效应与Ac-SDKP一致性, 采用荧光显微镜观察FAM-Aca-SDKP与HSC-T6结合, 采用流式细胞术检测FAM-Aca-SDKP与HSC-T6结合的时间-浓度效应。据资料不同采用t检验或秩和检验进行统计学分析。结果不同浓度的Ac-SDKP及FAM-Aca-SDKP与HSC-T6孵育24 h后, 均观察到HSC-T6表达I型前胶原增加, 而作用时间为0.5 h时, Ac-SDKP和FAM-Aca-SDKP导致I型胶原表达分别下降30%～50%;FAM-Aca-SDKP与HSC-T6共孵育后, 在荧光显微镜下观察到细胞表面出现显著绿色荧光, 给予Ac-SDKP竞争抑制可显著减少细胞表面的荧光强度;流式细胞术检测显示, 在FAM-Aca-SDKP浓度为0～50 μmol/L时, 荧光阳性细胞率从0快速上升至约12%, 而在浓度为50～100 μmol/L, 阳性细胞率仅从约12%上升至约14%, 并且给予Ac-SDKP共孵育可显著降低阳性细胞百分率;FAM-Aca-SDKP阳性细胞数在孵育45 min达到高峰, 随后逐渐降低。结论 FAM-Aca-SDKP可结合于HSC-T6细胞表面, 表现出竞争性抑制、可饱和、时间-浓度效应等配体-受体结合特征。

• 单位
  上海交通大学医学院附属新华医院; 新疆医科大学第二附属医院