弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在IBRS-2细胞内的表达

作者：江涛; 张东林; 聂浩; 姚宝安; 赵俊龙

来源：畜牧兽医学报, 2007, (08): 827-831.

• 刚地弓形虫
• MIC3
• 基因克隆
• 真核表达 Toxoplasma gondii
• gene clone
• eukaryotic expression

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具...

• 单位
  动物科学学院; 农业微生物学国家重点实验室; 长江大学