白藜芦醇对卵巢低反应小鼠保护作用的机制研究

作者：郝健亨; 赵越梦; 王海军; 曹玉霞; 兰颖; 冀来喜^*

来源：中国中药杂志, 2023, 48(21): 5888-5897.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20230706.402

• 白藜芦醇
• 卵巢低反应
• 网络药理学
• 信号通路
• 凋亡

探讨白藜芦醇(resveratrol, Res)对卵巢低反应(poor ovarian response, POR)小鼠的治疗作用和潜在机制。通过网络药理学收集Res和POR的共有靶点基因，使用基因本体论(Gene Ontology, GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路富集分析筛选关键的信号通路，并通过动物实验验证。将筛选后动情周期规律的小鼠随机分成正常组、POR组以及Res低、高剂量组。正常组给予等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃，POR组以及Res低、高剂量(20、40 mg·kg-1)组小鼠给予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg-1)灌胃2周，造模完成后，Res低、高剂量组小鼠给予连续灌胃治疗2周，正常组和POR组给予等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃。治疗结束次日各组小鼠开始促排卵并完成取材。采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠的动情周期变化，检测小鼠的获卵数、卵巢湿重与卵巢指数，通过酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测血清中抗缪勒管激素(anti-mullerian hormone, AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone, FSH)、雌二醇(estradiol, E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone, LH)的含量；通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色和脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)染色法观察卵巢组织形态和卵巢颗粒细胞凋亡情况；通过Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、叉头盒O(forkhead box O,FOXO)3a、缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor, HIF)-1α、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X的蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)蛋白表达水平的变化。最终收集到Res和POR交集靶点222个；GO富集分析发现，Res-POR参与的生物过程(biological process)主要是氧化应激反应。KEGG富集分析发现，Res可以通过PI3K/AKT、HIF-1、FOXO等信号通路参与POR治疗。动物实验表明，与正常组比较，POR组小鼠动情周期紊乱率升高，卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少且形态较差，闭锁卵泡增多，卵巢颗粒细胞凋亡量提高，获卵数下降，卵巢湿重与卵巢指数降低，血清中FSH和LH含量升高、AMH和E2含量下降，卵巢组织HIF-1α、FOXO3a和Bax蛋白表达水平升高，PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达水平降低；与POR组比较，Res低、高剂量组小鼠动情周期紊乱率降低，卵泡数量和形态得到不同程度改善，卵泡闭锁数量降低，卵巢颗粒细胞凋亡程度得到改善，获卵数升高，卵巢湿重与卵巢指数提高，血清中FSH和LH含量降低、AMH和E2含量升高，卵巢组织HIF-1α、FOXO3a和Bax蛋白表达水平降低，PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达水平升高。综上所述，Res可以抑制小鼠卵巢细胞凋亡，改善卵巢反应下降，其机制可能与调节PI3K/AKT/FOXO3a和HIF-1α通路中的关键分子有关。

• 单位
  成都中医药大学附属医院; 山西中医药大学; 第二临床学院; 成都中医药大学