应用分子生物学技术检测及蛋白质模型预测1例弱D型54

作者：芮雪; 张钰; 蔡杰; 许纪玲; 傅强; 何成涛^*

来源：临床检验杂志, 2023, 41(03): 186-190.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2023.03.06

• 弱D型
• 血型血清学
• 序列特异性引物PCR
• 外显子测序
• 家系研究

目的 对1例血型血清学检测为RHD变异型的样本进行基因分型，并进行家系调查分析。方法 运用血型血清学检测方法对先证者及其家系样本进行RHD确认及RH血型抗原表位检测，用序列特异性引物PCR(sequence specific primer PCR,PCR-SSP)法分析RHD基因外显子的表达，运用Sanger和SMRT (single molecule real-timesequencing)测序法对先证者及其家系样本进行RHD基因的1～10外显子测序分析。通过AlphaFold模拟构建蛋白质三级结构，将突变前后的蛋白质结构进行叠合以观察结构内分子间相互作用力的改变。结果 先证者为RHD弱表型，其他抗原为Ccee,直接抗人球蛋白试验、抗体筛查、抗体鉴定试验均为阴性，PCR-SSP初步分型为RHD阳性。其父母血型血清学及PCR-SSP结果均为RHD阳性。SMRT测序结果显示先证者母亲为RHD+/RHD-杂合子。Sanger测序结果显示，先证者父亲携带弱D型54等位基因。AlphaFold建模预测揭示，p.Ser122Leu突变不能与146位GLU形成氢键相互作用。结论 该样本为弱D型54,p.Ser122Leu突变导致氨基酸内部分子间作用力发生改变，从而引起突变后蛋白质结构和功能的部分改变。

• 单位
  南京红十字血液中心