乙型肝炎病毒DNA超敏定量检测试剂盒的研制和性能评价

作者：吴大治

来源：生物化工, 2023, 9(02): 1-7.

• 乙型肝炎病毒DNA
• 超敏检测
• 荧光PCR
• 性能评价

目的：研制一种基于双波长荧光PCR技术的乙型肝炎病毒DNA超敏定量检测试剂盒，并对其性能进行评价。方法：根据乙型肝炎病毒不同基因型中的保守序列设计特异性引物与TaqMan荧光探针，并设计非竞争性的外源性内参引物与探针，优化确定双波长荧光PCR反应体系和扩增条件；同时根据磁珠法原理，优化确定适合血清、血浆样本的病毒DNA高效提取方法，完成乙型肝炎病毒DNA超敏定量检测试剂盒的研制；最后测试本试剂盒的最低检出限、准确度、线性范围、精密度、基因型覆盖及特异性等性能指标，并完成166例临床样本的对比测试，评价试剂盒的临床应用性能。结果：自主研制的乙型肝炎病毒DNA超敏定量检测试剂盒最低检出限为5 IU/mL，线性范围为20～2.0×109 IU/mL，精密度CV值≤5%、覆盖型别包括A～H八种基因型，对常见的病原体检测无交叉反应。166例临床样本的对比检测结果表明，本试剂盒与已上市流通试剂盒的定性检测结果符合性良好，临床阳性符合率为98.67%(95%置信区间：95.27%,99.84%)、阴性符合率93.75%(95%置信区间：69.77%,99.84%)、总体符合率98.19%(95%置信区间：94.81%,99.63%)；同时定量检测结果具有较高相关性(斜率0.99，相关系数|R|=0.982)。结论：自主研制试剂盒可实现乙型肝炎病毒DNA超敏精准定量检测，适合临床推广应用。