嗜热古菌 Archeoglobus fulgidus RecJ核酸酶的表达纯化及酶学特征

作者：王天乐; 刘喜朋

来源：微生物学报, 2020, 1-13.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20200169

• 嗜热古菌
• DNA修复
• RecJ核酸酶
• 核酸酶 thermophilic archaea
• DNA repair
• recJ nuclease
• nuclease

【目的】克隆表达嗜热古菌Archeoglobus fulgidus (A. fulgidus)来源的RecJ核酸酶基因(ORF编号AF＿0699，NCBI数据库基因登陆号为AF＿RS03550)，对该重组蛋白的核酸酶活性及酶学特征进行鉴定和分析。【方法】将A. fulgidus RecJ (AfuRecJ)核酸酶在大肠杆菌中进行重组表达，经亲和层析纯化得到电泳纯蛋白；利用人工合成的带有末端荧光标记的寡核苷酸作为底物，体外反应后，利用8 mol/L尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定AfuRecJ核酸酶的水解产物。【结果】AfuRecJ核酸酶具有单链DNA特异性的3’ –5’外切核酸酶活性，酶活性依赖...

• 单位
  生命科学技术学院; 微生物代谢国家重点实验室; 上海交通大学