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摘要
建立一种有效测定牦牛皮胶与牛皮明胶中18种氨基酸含量的异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生-高效液相色谱法。对PITC衍生方法进行了优化,方法无需干燥和有机溶剂萃取过量PITC的步骤。牦牛皮使用胃蛋白酶在37℃下酶解72 h,酶解物冷冻干燥保存。样品用6.0 mol/L盐酸,110℃水解后,以PITC为衍生试剂进行衍生处理。采用Shiseido Capcell Pak C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.14 mol/L乙酸钠-0.5 m L/L三乙胺水溶液(p H 6.08)和60%乙腈,梯度洗脱,流速为1 m L/min,检测波长为254 nm。18种氨基酸在0.280 mg/L浓度范围内与峰面积间的线性关系良好(r2≥0.999 2),检出限为0.010.39 mg/kg,平均回收率为78.7%121.0%,相对标准偏差(RSD)为0.05%12.0%。结果表明,该方法衍生化步骤简单、灵敏度高、前处理时间短,可用于牛科动物皮胶中多种氨基酸成分和含量的测定。
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