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摘要
为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测，本研究在5%CO2的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111，对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传进化分析，结果显示3株分离株与曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)模式菌株CCUG 74657T及其它M. pernigra分离株的16S r DNA基因序列的同源性达99.6%以上，且3株分离株与M. pernigra参考株形成同一个进化分支，表明3株分离株均为M. pernigra。采用琼脂扩散法检测3株分离株对10类32种抗菌药物的敏感性，结果显示3株分离株对青霉素类的阿莫西林克拉维酸、头孢菌素类的头孢噻吩、喹诺酮类的氧氟沙星等29种抗菌药物敏感。将3株分离株感染小鼠进行致病性试验，结果显示3株分离株均能引起小鼠呼吸道疾病。采用Illumina Miseq和PacBio高通量测序平台对分离株ZY171111进行全基因组高通量测序并预测其毒力基因和耐药基因，基因组序列分析结果显示，分离株ZY171111基因组全长2 197 384 bp,G+C摩尔含量为39.1%，基因组携带1 978个蛋白编码基因，其中包括溶血素基因hlyB、黏附相关基因htpB、生存胁迫相关基因clpP和katA等32个毒力基因和磺胺类耐药基因folP、氨基糖苷类耐药基因StrA、喹诺酮类耐药基因gyr A和parC、甲氧苄啶耐药基因dfr A3等39个耐药相关基因。本研究在我国首次分离到M. pernigra，证实我国存在奶牛和山羊M. pernigra感染，并于国内外首次报道M. pernigra的耐药性、耐药基因及其对小鼠的致病性，上述结果为深入研究M. pernigra的致病性和耐药性提供菌种资源和基因组数据。
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