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摘要
目的 观察缺血性脑卒中大鼠采用黑色素纳米颗粒(MNPs)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植后神经功能、脑梗死体积及炎性因子水平变化，探讨其对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。方法 取SD乳鼠20只，处死后分离股骨和胫骨，采用全骨髓贴壁法分离BMSCs。取第3代BMSCs,显微镜下观察细胞形态，应用流式细胞仪检测细胞表面CD90、CD29、CD45、CD44表达情况。采用化学合成法制备MNPs,将MNPs悬液加入制备的BMSCs处理24 h,制备MNPs-BMSCs细胞悬液。取72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BMSCs组和MNPs-BMSCs组各18只，模型组、BMSCs组和MNPs-BMSCs组大鼠采用Longa改良线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞模型，假手术组大鼠不剪开颈总动脉和插入线栓，其他操作同模型组。BMSCs组和MNPs-BMSCs组大鼠于造模后24 h尾静脉分别注射1 mL BMSCs、MNPs-BMSCs细胞悬液，假手术组和模型组大鼠分别注射1 mL无菌1×PBS缓冲液。模型组、BMSCs组和MNPs-BMSCs组大鼠均于移植第1、3、7天行改良神经功能缺损评分(mNSS)。移植第7天，处死4组大鼠，取出完整大脑，观察脑组织形态，采用TTC染色法观察模型组、BMSCs组和MNPs-BMSCs组脑梗死体积和脑组织总体积，计算脑梗死体积百分比；采用免疫荧光法检测4组脑组织受体相互作用蛋白(RIP)1、RIP3和cleaved caspase-3阳性细胞数，计算阳性细胞百分比；采用ELISA法检测4组脑组织肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β水平。结果 (1)分离的第3代BMSCs快速贴壁生长，外观为典型的长梭形，呈放射状或漩涡状生长；细胞表面标志物CD29、CD90、CD44、CD45的阳性表达率分别为99.7%、97.3%、98.2%、2.77%,符合BMSCs特征。(2)模型组、BMSCs组、MNPs-BMSCs组大鼠移植第1、3、7天mNSS评分均依次降低(P<0.05);移植第1天3组mNSS评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);移植第3、7天，MNPs-BMSCs组mNSS评分均低于BMSCs组、模型组(P<0.05),BMSCs组低于模型组(P<0.05)。(3)移植第7天，MNPs-BMSCs组大鼠脑梗死体积百分比[(10.49±1.52)%]小于BMSCs组[(15.82±1.33)%]和模型组[(21.08±2.48)%](P<0.05),BMSCs组小于模型组(P<0.05)。(4)模型组脑组织RIP1[(32.83±2.86)%]、RIP3[(20.67±1.97)%]、cleaved caspase-3[(39.33±2.58)%]阳性细胞百分比及脑组织肿瘤坏死因子-α[(213.08±8.77)pg/mL]、白细胞介素-1β[(84.57±5.46)pg/mL]水平均高于BMSCs组[(14.83±1.60)%、(11.67±1.63)%、(22.17±1.72)%、(182.62±10.59)pg/mL、(74.93±4.35)pg/mL]、MNPs-BMSCs组[(8.83±2.48)%、(6.67±1.21)%、(15.33±2.66)%、(170.65±6.11)pg/mL、(69.89±2.80)pg/mL]和假手术组[(3.83±2.14)%、(4.00±1.41)%、(10.50±1.51)%、(128.59±6.14)pg/mL、(31.90±6.19)pg/mL](P<0.05),BMSCs组均高于MNPs-BMSCs组、假手术组(P<0.05),MNPs-BMSCs组均高于假手术组(P<0.05)。结论 MNPs联合BMSCs移植可改善缺血性脑卒中大鼠神经功能、缩小脑梗死体积，二者对抑制脑组织细胞凋亡和炎性反应具有协同作用。
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单位广西医科大学; 第二附属医院神经内科
