花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

作者：易海涛; 刘志刚; 刘芳; 闫浩; 汤慕瑾; 肖小军; 夏立新

来源：中国免疫学杂志, 2011, (04): 352-355.

• 花生
• 过敏原
• Ara h 8
• 克隆表达
• 纯化
• 免疫印迹 Arachis hypogaea L.
• Allergen
• Ara h 8
• Cloning and expression
• Purification
• Western blot

目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。重组蛋...

• 单位
  呼吸疾病国家重点实验室; 深圳大学