稳定沉默NF kappa B p65 HT 29细胞系建立及其裸鼠种植瘤药物敏感性的检测

作者：何建明; 江恒; 陈克力; 庞学利; 黄海辉; 肖红; 梁后杰

来源：肿瘤预防与治疗, 2009, (04): 363-366+465.

• 结肠癌
• NF kappa B
• 逆转录病毒
• RNAi

目的:利用逆转录病毒介导的ARNA稳定沉默NF kappa B p65基因,观察沉默NF kappa B p65对HT29细胞药物敏感性的影响。方法:设计并合成针对p65基因的shRNA序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT 29;G418筛选阳性细胞,局部消化法挑选单克隆;Western blot检测蛋白表达水平;于裸鼠皮下接种细胞形成种植瘤。结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被 Hind Ⅲ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800 hp片段。测序结果显示,针对NF kappa B p65基因的shRNA序列成功插人逆转录病毒质粒。转染逆转录病毒载体的HT 29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Western blot结果显示逆转录病毒介导的shRNA有效沉默NF kappa B p65基因。经化疗后,沉默NF kappa B p65基因HT 29组的裸鼠种植瘤显著性低于HT 29组。结论:逆转录病毒介导的shRNA能高效、特异、稳定沉默NF kappa B p65基因,提高结肠癌裸鼠种植瘤对奥沙利铂的药物敏感性。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学