Peroxiredoxin-1基因沉默对转化生长因子β1促进肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

作者：刘宝欣; 刘英宇; 魏中秋; 梁婷婷; 范玉磊; 杨方; 孙影

来源：重庆医学, 2016, 45(29): 4099-4102.

• 活性氧
• 转化生长因子-β1
• 胶原
• Peroxiredoxin-1

目的探讨Peroxiredoxin-1(Prx-1)基因沉默对转化生长因子β1(TGF-β1)促进肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原的影响及其作用机制。方法体外培养肺成纤维细胞分为4组:对照组(0.4%血清),TGF-β1组(5μg/L),TGF-β1+阴性转染组(5μg/L TGF-β1+阴性对照siRNA),TGF-β1+Prx-1siRNA转染组(5μg/L TGF-β1+Prx-1siRNA)。利用脂质体Lipo2000将阴性对照siRNA和Prx-1siRNA分别转染到TGF-β1+阴性转染组和TGF-β1+Prx-1siRNA转染组的肺成纤维细胞中,转染48h后用于后续实验。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染后各组的Prx-1mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Akt(p-Akt)及Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白水平,2,7-二氯荧光素二乙酸检测活性氧(ROS)水平。结果 (1)Prx-1siRNA转染肺成纤维细胞后,TGF-β1+Prx-1siRNA转染组的Prx-1mRNA表达明显降低。(2)与对照组比较,TGF-β1组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及p-Akt蛋白水平均明显增加(0.34±0.06 vs.0.58±0.06、0.42±0.05 vs.0.56±0.06、2 988±379 vs.4 315±580和0.29±0.05 vs.0.66±0.07,差异有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β1组比较,TGF-β1+阴性转染组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及pAkt水平无明显变化(P>0.05),但TGF-β1+Prx-1siRNA转染组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及p-Akt蛋白水平均进一步增高(0.58±0.06 vs.0.79±0.09、0.56±0.06 vs.0.77±0.08、4 315±580 vs.5 841±782和0.66±0.07 vs.0.93±0.15,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进Akt的激活和肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原;而沉默Prx-1基因可激活ROS/Akt通路,从而有助于TGF-β1促进肺成纤维细胞合成胶原。

• 单位
  唐山市工人医院; 基础医学院; 华北理工大学