APE/Ref-1基因重组腺病毒的构建表达和鉴定

作者：姜振东; 魏运军; 张学渊; 邓凤莲; 卓贤露

来源：第三军医大学学报, 2006, (16): 1694-1697.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2006.16.019

• 氧化还原因子-1
• 重组腺病毒
• 耳蜗螺旋神经节
• 氧化损伤

目的构建表达氧化还原因子-1(APE/Ref-1)基因的复制缺陷型重组腺病毒,为进一步研究APE/Ref-1在耳蜗螺旋神经节氧化损伤病理过程中的作用机制提供实验基础。方法应用RT-PCR技术从大鼠脑组织总RNA克隆出APE/Ref-1基因,将APE/Ref-1基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后,转染293细胞进行包装,并反复感染293细胞进行扩增。对其进行安全性、滴度以及活性等检测。采用Westernblot对APE/Ref-1蛋白表达进行检测和鉴定。结果克隆出大鼠APE/Ref-1基因,经测序证实结果正确;得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA证实含目的基因。结论成功构建了表达APE/Ref-1的复制缺陷型重组腺病毒。为进一步研究APE/Ref-1在耳蜗螺旋神经节的氧化损伤过程中作用机制奠定了实验基础。

• 单位
  重庆医科大学; 贵阳医学院附属医院; 中国人民解放军陆军军医大学