金黄色葡萄球菌FnbpA免疫优势片段的构建及免疫保护性研究

作者：杨汐静; 陈晓婷; 刘道龙; 杨阳; 杨光

来源：重庆医学, 2020, 49(05): 813-818.

DOI：10.3969/j.issn.1671-8348.2020.05.028

• 金黄色葡萄球菌
• FnbpA
• 重组蛋白
• 免疫保护作用

目的构建金黄色葡萄球菌FnbpA蛋白免疫优势片段原核表达菌株并研究其重组蛋白免疫原性。方法根据预测确定N区优势片段,通过聚合酶链反应(PCR)法对目的片段进行基因扩增,转入表达载体pET-32a,并导入宿主菌大肠杆菌(E.coli)Rosstta中进行原核表达;将N区优势片段与重复区优势片段通过重叠延伸聚合酶链反应(overlap PCR)融合,原核表达;将蛋白FL纯化,分别免疫Balb/c小鼠,并检测小鼠IgG水平、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、免疫保护率。结果各重组蛋白在E.coli Rosstta中均获得表达,表达后FnbpA301-430aa、FL蛋白大小分别约39.3×103,49.1×103;抗体水平检测结果表明重组蛋白FL抗体水平接近全蛋白FnbpA,高于FnbpA301-430aa;重组FL组淋巴细胞分泌IL-4、IFN-γ、IL-17的能力与FnbpA301-430aa比较差异有统计学意义(P<0.05);攻毒结果表明,全蛋白FnbpA实验组免疫保护性最好,FL实验组保护性效果优于FnbpA301-430aa。结论成功构建了金黄色葡萄球菌FnbpA免疫优势截短体蛋白的原核表达菌株,重组蛋白FL具有良好的免疫保护性。

• 单位
  生命学院; 四川大学华西医院; 黑龙江八一农垦大学