Kruppel样转录因子2对人肝窦内皮细胞体外迁移的影响

作者：李娜; 刘楚; 潘独伊; 曾于珍; 周继; 曾晓清; 罗添成; 陈世耀^*

来源：中华医学杂志, 2018, 98(07): 527-532.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2018.07.009

• Kruppel样转录因子类
• 内皮细胞
• 细胞迁移
• Src族激酶类
• 丝裂原活化蛋白激酶类

目的探索Kruppel样转录因子2(KLF2)对肝窦内皮细胞(LSEC)体外迁移的影响及其机制。方法采用慢病毒感染的方式构建过表达和干扰KLF2表达的LSEC(分别为LV5-KLF2和LV3-shKLF2), 采用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测病毒感染效率, 未处理LSEC作为野生对照(WT)组。采用Transwell实验检测KLF2表达的改变对LSEC迁移能力的影响, 荧光定量PCR和蛋白印迹法检测促迁移因子血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的表达, 蛋白印迹法检测迁移相关信号通路蛋白Src, P38 MAPK, P44/42 MAPK的表达。结果 Transwell实验计数12 h细胞迁移数, 过表达KLF2可抑制LSEC的体外迁移能力, LV5-KLF2组LSEC细胞迁移数目较LV5-NC和WT组少[(35.6±1.4)、(71.3±2.4)和(69.3±1.6)], 差异均有统计学意义(均P<0.001)。而下调KLF2表达后, LV3-shKLF2组LSEC的细胞迁移能力较LV5-NC和WT组增强, 细胞迁移数目较对照组多[(189.5±5.4)、(83.4±2.5)和(82.2±3.4)], 差异均有统计学意义(均P<0.001)。荧光定量PCR和蛋白印迹法证实过表达KLF2可抑制LSEC中促迁移因子VEGFR2的mRNA和蛋白水平的表达, 而干扰KLF2则上调VEGFR2的mRNA和蛋白表达水平。蛋白印迹结果提示过表达KLF2, 抑制LSEC中信号通路蛋白p-Src、p-P38 MAPK及p-P44/42的表达, 而干扰KLF2则促进LSEC中上述磷酸化蛋白的表达。结论 KLF2可能通过Src/MAPK通路抑制LSEC的体外迁移。

• 单位
  复旦大学附属中山医院