miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制

作者：吴静漪

来源：山东医药, 2023, 63(07): 25-29.

• 慢性肾脏病
• 足细胞凋亡
• 微小RNA-199b-5p
• 阿霉素
• 脂肪细胞质膜相关蛋白

目的 探讨miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制。方法 体外培养小鼠足细胞，用阿霉素构建足细胞凋亡模型。将足细胞随机分成对照组、阿霉素组、阿霉素+miR-199b-5p mimic组、阿霉素+NC mimic组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor组、阿霉素+NC inhibitor组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-脂肪细胞质膜相关蛋白（APMAP）组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-NC组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-APMAP RNAi组和阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-NC RNAi组，分别给予miR-199b-5p mimic/inhibitor、过表达/敲低APMAP腺病毒转染，使miR-199b-5p过表达/沉默表达以及APMAP过表达/沉默表达。用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-199b-5p及足细胞标志蛋白（Podocin）、凋亡相关基因（Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3）、APMAP mRNA表达，用Western blotting法检测细胞内Podocin、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、APMAP及NF-κB信号通路相关蛋白（NIK、TRAF3）表达。用生物信息学分析miR-199b-5p的特异性下游靶基因；将细胞随机分为NC mimic+WT-APMAP组、miR-199b-5p+WT-APMAP组、NC mimic+MUT-APMAP组、miR-199b-5p+MUT-APMAP组，用双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p的直接靶基因。结果 与对照组比较，阿霉素组miR-199b-5p、Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量高（P均<0.05）,Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量低（P均<0.05）。与阿霉素+NC mimic组比较，阿霉素+miR-199b-5p mimic组Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量低，Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量高（P均<0.05）。与阿霉素+NC inhibitor组比较，阿霉素+miR-199b-5p inhibitor组Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量高，Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量低（P均<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实，与NC mimic+MUT-APMAP组比较，miR-199b-5p+WT-APMAP组APMAP荧光素酶活性低（P<0.05）。与阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-NC组比较，阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-APMAP组TRAF3相对表达量高，NIK相对表达量低（P均<0.05）。与阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-NC RNAi组比较，阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-APMAP RNAi组TRAF3相对表达量低，NIK相对表达量高（P均<0.05）。结论 miR-199b-5p通过靶向APMAP激活NF-κB信号通路促进阿霉素诱导足细胞凋亡。