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摘要
目的探讨巯基聚乙二醇(polyethylene glycol-thiol, PEG-SH)修饰的GNPs/miR-29纳米微粒诱导神经干细胞增殖、分化的作用。方法采用氧化还原法制备PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒, 检测紫外吸收光谱、粒径分布及Zeta电位。选取15只成年雄性SD大鼠, 以改良Allen法构建脊髓损伤模型;在脊髓损伤区域分别植入人工合成的miR-29和PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒, 采用凝胶电泳法分析miR-29表达的稳定性。取SPF级SD乳鼠10只, 分离培养神经干细胞, 使用Nestin、GFAP及NSE抗体鉴定细胞。以CCK-8法检测人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒对神经干细胞活性、增殖的影响。将人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒与神经干细胞共培养1周, 观察神经元突起的密度、长度及数量。结果 PEG-SH修饰的纳米金呈棕红色;透射电镜下为均匀分布的球形;紫外吸收光谱呈现单峰波, 在523 nm附近出现吸收峰值;Zeta电位随PEG-SH含量增加而逐渐增大, 峰值为(22.5±5.2) mV;粒径随PEG-SH含量增加早期迅速达峰值后下降维持至稳定水平。脊髓损伤区域植入miR-29及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒0～6 h, 人工合成的miR-29组可见清晰的表达条带, 但12～24 h表达条带迅速消失;PEG-SH GNPs/miR-29微粒组, 始终能观察到清晰的表达条带。接种细胞第1、3、5、7天, miR-29组OD值分别为0.34±0.17、0.78±0.31、1.28±0.68、1.64±0.38, 与DMEM组相比差异无统计学意义;GNPs组、PEG-SH GNPs组以及PEG-SH GNPs/miR-29组的OD值与DMEM组相比差异均无统计学意义。PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒组神经元突起的密度为(56.38±3.65) μm2、长度为(78.25±3.72) μm、数量为(356±34.52)个/1 000倍视野, 均大于miR-29组[分别为(12.53±3.26) μm2、(11.35±3.36) μm、(158±32.85)个/1 000倍视野]、PEG-SH GNPs组[分别为(14.12±3.45) μm2、(12.56±3.57) μm、(160±32.52)个/1 000倍视野]和生理盐水组[分别为(10.25±3.52) μm2、(9.35±3.28) μm、(152±32.28)个/1 000倍视野], 但与胎牛血清组[分别为(56.48±3.56) μm2、(76.85±3.65) μm、(350±35.26)个/1 000倍视野]比较差异无统计学意义。结论 PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒具备良好的生物学性能, 可诱导神经干细胞增殖、分化, 对miR-29有一定程度的保护效应。
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单位温州医科大学; 南方医科大学珠江医院; 浙江省立同德医院
