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摘要
【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染对新西兰白兔的致病性以及BVDV E2重组蛋白的免疫效果。【方法】将实验室培养保存的BVDV病毒纯化并按照Reed-Muench法测定其病毒滴度。在致病性试验中，将10只新西兰白兔随机分为感染组和对照组，每组5只。感染组用1 mL纯化的BVDV病毒攻毒(滴鼻500μL、耳缘静脉注射500μL),对照组用等体积的生理盐水处理，连续3 d,每天1次，每天观察各组兔的临床症状并测量体温；分别于接种病毒后第6、9、12、15、17天通过耳缘静脉采集血液检测血常规；感染病毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定，采集后剖杀并采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织，制备病理切片观察病理变化。在免疫效果评价试验中，将10只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组，每组5只，免疫组用E2重组蛋白(1 mg/只)与佐剂混合后经肌内多点注射免疫新西兰白兔，对照组接种等体积生理盐水；共免疫2次，2次免疫间隔为14 d。在一免后0、7、14、21、28 d采集血清，通过间接ELISA方法检测血清中抗重组蛋白特异性抗体水平；在一免后第28天按致病性试验中方法攻毒，在攻毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定，采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织制备病理切片观察病理变化及免疫组织化学检测。【结果】纯化后BVDV的病毒滴度为4.16×106 TCID50/mL。与对照组相比，感染组部分新西兰白兔6 d内活动减少，采食略微减少，6 d后逐渐恢复正常，在感染第13天出现腹泻症状，从第5天开始体温略微升高，但均在正常范围内波动。与对照组相比，在攻毒第6和9天，感染组白细胞和血小板分别显著和极显著降低(P<0.05;P<0.01);在攻毒第12、15和17天，感染组白细胞、血小板和淋巴细胞均极显著降低(P<0.01)。鼻拭子RT-PCR检测为阳性，气管、肺脏、脾脏及小肠组织表现出轻度至重度的组织病理学变化。间接ELISA检测结果表明，在一免后7 d时，血清抗体滴度为1∶16～1∶32;在一免后28 d时，血清抗体滴度为1∶256～1∶512;免疫攻毒组新西兰白兔鼻拭子经RT-PCR检测为阴性；组织病理学观察显示，免疫攻毒组气管及肺脏表现出轻微的组织病理学变化。免疫组化检测结果显示，免疫组结果均呈阴性，对照组结果均为阳性。【结论】通过滴鼻及耳缘静脉注射BVDV的方式可以构建新西兰白兔致病模型，BVDV E2亚单位疫苗能够刺激机体产生特异性抗体，起到免疫防御的作用。
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