迟钝爱德华氏菌RNA提取及痕量基因组DNA去除方法探究

作者：**平; 叶江; 张惠展

来源：生物技术通报, 2012, (06): 179-182.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2012.06.032

• 迟钝爱德华氏菌
• RNA
• 基因组DNA
• DNaseI RT-PCR Edwardsiella tarda RNA Genomic DNA DNase I RT-PCR

迟钝爱德华氏菌EIB202是一类细胞壁结构特殊的革兰氏阴性菌,高质量RNA提取相对较难。为了从转录组水平研究这类致病菌的致病机理,需要摸索有效的RNA提取及RNA样品中痕量基因组DNA去除方法。对常规RNA提取步骤进行改进,增加PBS清洗、反复冻融及较高浓度溶菌酶处理等步骤;另外,利用小体系基因组DNA去除系统,Mg2+与Mn2+协同激活DNase I去除RNA样品中基因组DNA污染。利用优化方法提取的RNA在质量及浓度(1 740 ng/μL)方面均有了显著改善,并建立了一套完全去除RNA样品中痕量基因组DNA污染的程序。

• 单位
  生物工程学院; 生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学