科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨通过金属螯合亲和层析的方法获得高纯度的人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)蛋白的可行性。方法采用蛋白抽提试剂破菌方法抽提包涵体蛋白,初步纯化后在变性条件下用组氨酸标签结合树脂进行亲和层析,以透析方法复性,对纯化样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹法、肽质量指纹谱鉴定。结果EOLA1蛋白在大肠杆菌中的表达主要以包涵体形式存在,初步纯化的包涵体中蛋白纯度>75%,亲和层析纯化后获得的蛋白纯度高达90%以上,肽质量指纹谱分析目的蛋白与理论蛋白肽段覆盖率较高。结论所应用的EOLA1蛋白纯化和复性方法简便有效,能够获得足量的高纯度EOLA1蛋白,有助于下一步制备EOLA1单克隆抗体及对相关基因进行功能研究。
- 单位
