摘要
目的:研究LYN在胃癌中的表达量,以及敲低LYN表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响和机制。方法:使用免疫组织化学方法 检测LYN在胃癌和癌旁组织的表达;利用脂质体Lipofectamine2000将shRNA-LYN转染到AGS(胃腺癌)细胞中,以未转染的胃癌细胞为对照组。CCK8和流式细胞术分别用于检测LYN敲低对AGS细胞增殖和凋亡的影响。利用蛋白印迹分析调查LYN敲低引起的AKT/m TOR信号通路相关蛋白,细胞凋亡相关蛋白Bcl2,Bax,Caspase-9和Casapse-3的表达量的改变,对其增殖及凋亡机制进行研究。使用生物信息学软件筛选出靶基因miR-496,western blot检测转染miR-496对LYN表达的影响。进行拯救实验,分析miR-496与LYN间的相互作用。结果:LYN在胃癌组织中的高表达的样本量为58例,显著高于癌旁组织的28例(P<0.05)。转染48h和72h后sh-LYN组细胞的吸光度值(0.0992±0.0346)和(1.0953±0.0379),明显低于NC组的(1.4123±0.1161)和(1.6717±0,0120)(P<0.05)。转染后sh-LYN组细胞的凋亡率(16.3567±0.5556)显著高于NC组(P<0.05)。敲低LYN后细胞Bcl2 (0.4629±0.0294),p-AKT (0.5565±0.0473),p-m TOR (0.6167±0.0459),p70S6K(0.6049±0.0570)表达量较NC对照组下降,而Bax(1.407±0.0528),Caspase-9(1.5200±0.1063),Caspase-3(1.4170±0.0751)表达量上升。转染miR-496后可以抑制AGS细胞中LYN的表达。结论:敲低LYN表达可抑制AKT/m TOR信号通路,从而达到抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡的作用,同时其对胃癌细胞的作用受MiR-496靶向调控。
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单位承德医学院附属医院