水稻中类受体蛋白激酶FERONIA-like Receptor 1的表达纯化及抗体制备

作者：吴秀秀; 蒋顺; 于峰; 曹建中; 汪龙^*

来源：生命科学研究, 2019, 23(05): 393-416.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2019.05.007

• 水稻
• FLR1
• 蛋白质表达纯化
• 抗体制备

类受体蛋白激酶参与调控植物的器官发育和抗逆性,是一种重要的蛋白激酶。通过对水稻中类受体蛋白激酶家族成员FERONIA-like receptor 1 (FLR1)进行蛋白质结构预测分析,发现FLR1蛋白具有跨膜结构,其N端在细胞膜外(FLR1-BW, 1～450 aa), C端在细胞膜内(FLR1-BN, 474～892 aa)。为了得到FLR1抗体用于其功能分析,将FLR1的N端和C端分别构建到原核表达载体pET-32a、pGEX-4T-1、pET-22b、pTriEx-4上,比较FLR1-BW和FLR1-BN在不同载体和不同条件下的表达效果。结果显示:FLR1-BW在pET-32a及pGEX-4T-1中能够有效表达,最优条件为16℃/16 h、0.5 mmol/L IPTG;而FLR1-BN蛋白表达后会对大肠杆菌产生细胞毒性,但在293细胞中能够表达。进一步利用纯化的FLR1-BW蛋白制备FLR1多克隆抗体,结果显示该抗体特异识别FLR1蛋白。本研究为类受体蛋白激酶的抗体制备提供了良好的思路并为研究FLR1功能奠定了基础。

• 单位
  中南林业科技大学; 湖南大学