发菜中超氧化物歧化酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：汪滢; 陈李萍; 陈晓; 章秀; 于晶; 王全喜

来源：植物研究, 2007, (03): 289-292.

• 发菜
• 超氧化物岐化酶基因克隆
• 诱导表达
• 酶活测定 Nostoc flagelliforme
• gene cloning of SOD
• induced expression
• activity measurement of SOD

采用基因工程技术从发菜总DNA中克隆了一段的基因序列,该序列与基因库中已公布的编码地木耳(Nostoc commnue)超氧化物歧化酶的氨基酸序列同源性为97%。将该基因插入含T7启动子质粒pET-32中构建表达质粒pET-sod,然后将该表达质粒转入大肠杆菌BL21中进行蛋白表达,表达菌株用1 mmol.L-1IPTG诱导表达数小时后,产生较多的重组的蛋白,且该蛋白以可溶性蛋白形式存在。SDS-PAGE分析表明,在相对分子量约为22 kd的位置有一条明显蛋白质带。将诱导表达后的蛋白通过亲和层析的方法进行蛋白纯化;NBT光还原法测定表达产物的比活力,每毫克纯化蛋白约为2 550 U。对纯化后的...

• 单位
  上海师范大学