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摘要
为明确大豆U-box型E3泛素连接酶介导植物抗病性的机理，以抗胞囊线虫品种灰皮支黑豆为材料，利用RT-PCR技术克隆GmPUB24基因的蛋白质编码区序列(coding sequence, CDS),对该基因进行生物信息学分析，并接种大豆胞囊线虫，进行诱导表达分析。结果表明，GmPUB24基因CDS总长1 254 bp,编码417个氨基酸，分子量为46.78 ku。蛋白质二级结构分析显示，GmPUB24编码的蛋白质含有α螺旋、无规则卷曲、延伸链、β折叠，α螺旋占比最高为58.9%,为亲水蛋白质且无跨膜结构域，无信号肽；蛋白质系统进化树表明，其与野生大豆亲缘性最高，亚细胞定位显示其定位于细胞质中。GmPUB24基因上游1 500 bp启动子区含有CGTCA-motif、TGACG-motif等响应抗病通路的作用元件，以及ABRE、WUN-motif、TATA-box等响应非生物胁迫的作用元件。实时荧光定量PCR(qRT-RCR)结果显示，GmPUB24在接种大豆胞囊线虫1～3 d持续上调表达，接种3 d时根部表达量为未接种线虫样本的6.14倍，表明GmPUB24基因可被大豆胞囊线虫诱导表达，可能参与大豆抵御胞囊线虫的过程。研究结果为阐明大豆U-box家族基因在抗大豆胞囊线虫病中的调控机制奠定了基础。
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