重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达

作者：郭爱疆; 才学鹏; 贾万忠; 房永祥; 乔军; 刘红霞; 潘小梅; 景志忠

来源：中国农业科学, 2009, (07): 2572-2578.

• 猪囊尾蚴
• AgB基因
• 重叠延伸PCR
• 真核表达
• BHK-21 Cysticercus cellulosae
• AgB gene
• splicing overlap extension PCR
• eukaryotic expression
• BHK-21

【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室