科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨长链非编码RNA(1ncRNA)NR-03444调控骨肉瘤多柔比星敏感性的作用机制。方法采用lncRNA-mRNA联合芯片筛选骨肉瘤多柔比星抵抗的MG63/DXR细胞和配对的亲本多柔比星敏感的MG63细胞中差异表达的lncRNA和mRNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证芯片结果的一致性,采用基因干预技术过表达lncRNA NR036444,采用CCK-8检测细胞增殖和多柔比星的敏感性,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,采用qRT-PCR检测骨肉瘤组织中lncRNA NR036444的表达水平。结果与MG63细胞比较,MG63/DXR细胞中1 761个lncRNA分子表达上调,1704个lncRNA分子表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。选取15个差异表达的lncRNA分子通过qRT-PCR法验证,其差异表达的趋势和倍数均与芯片结果一致。在MG63/DXR细胞中,lncRNA NR036444为下调倍数最大(22倍)的lncRNA。过表达组、阴性对照组和空白对照组细胞的50%抑制浓度(IC50)分别为(5.77±0.25)μg/mnl、(12.12±0.31)μg/ml和(12.73±0.50)μg/ml;与阴性对照组比较,过表达组细胞的IC50值下降了49.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。过表达组、阴性对照组和空白对照组G1期细胞比例分别为(90.12±0.08)%、(33.36±0.85)%和(39.38±1.02)%;与阴性对照组和空白对照组比较,过表达组使细胞周期停滞在G1期,差异均有统计学意义(均P<0.01)。过表达组、阴性对照组和空白对照组早期凋亡细胞比例分别为(86.40±1.80)%、(4.35±2.03)%和(0.25±0.02)%,晚期凋亡细胞比例分别为(11.40±1.08)%、(4.23±1.12)%和(0.28±0.12)%;过表达组早期和晚期凋亡细胞比例均高于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。化疗抵抗组和化疗敏感组肿瘤组织中lncRNA NR036444的相对表达水平分别为19.67±1.53和77.67±2.52,差异有统计学意义(P<0.01)。高表达组和低表达组患者的术后总生存时间分别为(48.2±1.8)个月和(24.6±2.4)个月,差异有统计学意义(P<0.01)。结论lncRNA NR036444可能是骨肉瘤多柔比星耐药形成过程中的重要分子,其可能作为区分骨肉瘤患者化疗敏感性和判断预后的生物标志物。
- 单位
