实时荧光定量PCR检测猪源Mx1方法的建立及应用

作者：张小敏; 周斌; 何丹妮; 庞然; 赵津; 陈溥言

来源：南京农业大学学报, 2013, (01): 92-96.

• 猪源Mx1
• 实时荧光定量PCR
• 标准曲线 porcine Mx1 gene(poMx1)
• real-time PCR quantitative assay
• standard curve

根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lg X+38.239 3(R2=0.998 5),灵敏度为1×102μL-1;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1的表达量最高(P<0.01),然后随着时间...

• 单位
  南京农业大学