检测粪便中GGⅡ型诺如病毒Real-time RT-PCR方法的建立

作者：司红丽; 王健伟; 徐樨巍; 王建华; 屈建国; 洪涛

来源：病毒学报, 2008, (03): 166-171.

• Real-time RT-PCR
• 人类杯状病毒
• 诺如病毒
• 检测

诺如病毒是世界急性胃肠炎的重要病原之一。为加强其控制,通过序列比对设计出针对GGⅡ型诺如病毒保守序列的特异性引物与探针,建立了TaqMan Real-time RT-PCR方法。结果显示,此方法对诺如病毒核酸检测高度特异,与轮状病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒等无交叉反应,最低检出限可达102拷贝,线性范围为109~102拷贝,标准曲线的相关系数为-1.00。针对标准品质粒检测的批内实验变异系数为0.28%~1.63%(n=6)、批间实验为0.28%~1.05%(n=3),对同一样品分6次进行RNA提取和逆转录,其变异系数为3.88%。对212份临床腹泻标本分别用常规RT-PCR和本文建立的TaqMan Real-time PCR进行检测,发现后者检出率略高于前者。这些结果提示此研究建立的诺如病毒的TaqMan Real-time RT-PCR检测方法可用于临床腹泻粪便标本的检测。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 动物科技学院; 首都医科大学附属北京儿童医院; 西北农林科技大学